文心兰生物钟基因 OnELF3 启动子克隆与表达分析

为了解文心兰生物钟基因 OnELF3 的转录调控，本研究采用 TAIL-PCR 技术从文心兰基因组中克隆到 OnELF3 基因起始密码子上游 2 204 bp 的启动子序列。使用 BDGP 、 PlantCARE 和 PLACE 在线软件对 OnELF3 基因启动子的转录起始位点与顺式作用元件进行预测。结果表明启动子序列除包含 TATA-box 和 CAAT-box 等启动子基本元件外，还包含组织特异性元件、光调控元件、植物激素响应元件、胁迫反应响应元件和昼夜节律调控元件等。为探究 OnELF3 启动子的表达活性，构建 pCAMBIA1301 - p OnELF3p : GUS 载体，利用农杆菌介导法，转化烟草与拟南芥。烟草叶片瞬时转化表明克隆的 OnELF3 启动子序列具有启动子活性。转化拟南芥结果表明， OnELF3 启动子能够驱动下游的 GUS 基因在 T 2 代拟南芥中稳定表达， GUS 组织染色显示该启动子呈现发育与组织特异性表达。这些结果为进一步研究文心兰 OnELF3 基因的转录表达调控与相关功能分析提供基础。