Relação parasito-hospedeiro na infecção de macrófagos por Clostridium chauvoei

Clostridium chauvoei e o agente etiologico do carbunculo sintomatico, doenca com alta taxa de letalidade e mortalidade que acomete bovinos jovens. Apesar da reconhecida importância dessa doenca, a sua patogenese e os mecanismos de virulencia do agente etiologico ainda nao foram completamente elucidados. Dentre as lacunas de conhecimento, destaca-se o mecanismo envolvido no trafego de C. chauvoei do intestino para a musculatura. Essa etapa, essencial para a deposicao do esporo no sitio de infeccao, permitiria que o agente permanecesse latente ate que encontrasse condicoes favoraveis para germinar e multiplicar. Diante do exposto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a capacidade de sobrevivencia de C. chauvoei apos internalizacao de macrofagos murinos da linhagem RAW 264.7 e macrofagos bovinos. Buscouse avaliar as diferencas quanto as taxas de sobrevivencia da forma vegetativa com a esporulada, bem como o perfil de transcritos de citocinas induzidos pela infeccao por uma dessas duas formas. Para isso, macrofagos da linhagem RAW 264.7 e macrofagos derivados de monocitos perifericos bovinos foram infectados com C. chauvoei na multiplicidade de infeccao (MOI) 1:50 com uma das seguintes formas bacterianas: vegetativa ou esporo. A sobrevivencia de C. chauvoei foi avaliada apos 1 (T1), 24 (T24), 48 (T48) e 72 (T72) horas de infeccao. Para se avaliar o perfil de transcritos de citocinas exibido por macrofagos bovinos infectados com C. chauvoei, os macrofagos foram infectados com C. chauvoei na MOI 1:50, sendo avaliados os tempos de T1, 6 (T6), 12 (T12) e T24 horas de infeccao. Os transcritos de citocinas dosados foram: interleucina 10 (IL-10), IL-4, IL-12, IL-23 e fator de crescimento beta (TGF-beta). C. chauvoei, tanto na forma esporulada quanto vegetativa, e capaz de resistir ao processo microbicida dos macrofagos por ate 72 horas de infeccao. Contudo, o prolongamento da infeccao com a forma vegetativa resultou em um decrescimo (p<0,01) do numero de bacterias internalizadas viaveis a partir do T48 de infeccao. Ao contrario, o numero de esporos internalizados viaveis permaneceu constante ao longo dos tempos de infeccao avaliados. Essa diferenca de sobrevivencia entre as formas infectantes (vegetativa e esporo) nao foi demonstrada no modelo de infeccao com macrofagos bovinos, no qual ambas as formas bacterianas permaneceram igualmente viaveis durante todo o periodo avaliado (T72). Com relacao ao perfil de transcritos de citocinas, observou-se que os macrofagos bovinos infectados com C. chauvoei na forma predominantemente vegetativa detinham um perfil de transcritos de citocinas pro-inflamatorias como IL-12 e IL-23 (p<0,001).Esse perfil de transcritos de citocinas poderia contribuir para os efeitos microbicidas desses fagocitos. Ao contrario, quando os macrofagos bovinos foram infectados com C. chauvoei na esporulada, observou-se um perfil de citocinas anti-inflamatorias, como IL-10 e TGF-beta. Esse perfil de transcritos de citocinas poderia determinar a latencia dessa forma bacteriana apos internalizacao por macrofagos. Os resultados apresentados indicam que C. chauvoei na forma vegetativa e na forma esporulada sao capazes de resistir aos efeitos microbicidas dos macrofagos, sendo a forma esporulada mais resistente a morte mediada por macrofagos por um periodo maior de infeccao. Essa e a primeira evidencia de que C. chauvoei e capaz de resistir aos efeitos microbicidas dos macrofagos e de que as formas infectantes (vegetativa e esporulada) exibem um perfil de transcritos de citocinas divergente.