Synthèses et utilisations de biotines bifonctionnelles pour le marquage de protéines

Les techniques de marquage de proteines constituent une etape cle dans l'etude de leur fonction, de leur localisation, et des interactions entre elles. Ainsi, durant ma these, deux techniques de marquage ont ete developpee : l'enzyme de biotinylation BirA et les inteines modifiees. Pour chaque methode, une sonde de biotine bifonctionnelle, modifiee sur l'azote 1'N par une fluoresceine, a ete synthetisee. Cependant, la biotine 1'N fluoresceine n'est pas substrat de BirA ou de son mutant BirA(Ser89Gly). Mais, l'utilisation d'inteines modifiees a permis de realiser un marquage in vitro : un fragment d'anticorps scFv anti-RhoB qui a localise, par fluorescence, RhoB endogene sur des cellules HeLa. Et aussi, avec cette meme technique, un marquage in vivo a permis de confirmer l'existence du recepteur des oestrogenes alpha membranaire.