Eukaryotic expression of CD3 E protein and generation of human CD3 monocl-onal antibody

目的:高效真核表达和纯化获得CD3E蛋白,制备全人源CD3抗体.方法:构建CD3E链胞外区真核表达质粒,利用293F悬浮细胞表达系统表达并纯化获得高纯度蛋白.选取人源化抗体转基因小鼠CAMouse-HG76进行免疫,通过细胞融合的方法获得杂交瘤细胞,再利用ELISA法和流式细胞分析法筛选CD3特异性单克隆抗体.结果:成功构建重组表达载体pcDNA3.4-CD3E-mFc,真核细胞表达并纯化获得纯度为85％的融合蛋白.免疫小鼠后效价高达1:102400.杂交瘤细胞筛选获得3株CD3特异性单克隆抗体.结论:本研究成功获得了CD3E融合蛋白和CD3单克隆抗体,为后续建立ELISA检测方法、全人源治疗性抗体药物及相关研究提供基础.