北京棒杆菌AS1．299高丝氨酸脱氢酶突变体L200F／D215K的异源表达及酶学性质

【目的】对北京棒杆菌Corynebacterium pekinense高丝氨酸脱氢酶（homoserine dehydrogenase，HSD）进行空间结构改造从而获得优良性能新酶。【方法】利用定点突变技术构建HSD双突变体L200F／D215A、L200F／D215E、L200F／D215G和L200F／D215K，并将其转入大肠杆菌E．coli BL21中进行高效表达，选取催化效率最高的双突变体L200F／D215K与双突变前的L200F进行动力学和酶学性质比较。【结果】HSD双突变体L200F／D215K的Vmax为36．92 U／mg，较L200F提高1．24倍；最适反应温度为37℃，较L200F提高2℃；最适反应pH为7．5，与L200F经验值相同；最适温度下的半衰期为4．16 h，较L200F提高1．12倍；L200F／D215K和L200F对有机溶剂和金属离子均表现出较好的抗性。【结论】HSD通过空间结构改造活力得到提高，并且其酶学性质得到优化。本研究有助于认识HSD突变体的酶学性质，为其新酶的研发利用提供有力依据。