应用CRISPR/Cas9敲除HeLa细胞 DDX 21基因对新城疫病毒复制的影响

解旋酶家族是一类对所有生物都至关重要的酶，主要功能是基因解旋，DEAD/H-box家族RNA解旋酶是一类重要的解旋酶。DEAD-box RNA解旋酶DDX21被证实可能调控宿主细胞先天性免疫。新城疫病毒（NDV）是一种对养禽业危害严重的病原，NDV能够通过多种手段调控宿主先天性免疫，为了探讨DDX21如何调控NDV复制，本研究应用CRISPR/Cas9系统建立DDX21基因敲除的HeLa细胞系，并验证其对NDV复制的影响。针对DDX21基因共设计6条sgRNA，构建敲除载体并电转染细胞，通过药物筛选、亚克隆筛选后，以PCR和Western blot进行敲除效率的双重鉴定，并比较野生型和DDX21敲除细胞中NDV的复制效率。结果显示，由于DDX21对细胞生长至关重要，因此仅获得一株DDX21杂合子敲除细胞，Western blot结果显示DDX21表达量被显著抑制，NDV对在敲除细胞上的复制滴度明显低于野生型细胞，说明DDX21发挥正调控NDV复制的作用，本试验为DDX21调控抗病毒先天性免疫研究奠定了基础。