Desarrollo de protocolos de regeneración de plantas via embriogenesis somatica y de transformación en vid (vitis vinifera l.)

En la Memoria de investigacion presentadas se abordan dos objetivos principales: 1,- Desarrollar un protocolo de regeneracion de plantas de vid por embriogenesis somatica. 2,- Establecer los parametros basicos para la transformacion de celulas de callo embriogenico mediante cocultivo con agrobacteium tumefaciens. Los resultados obtenidos en el primer objetivo han permitido establecer un protocolo de regeneracion de plantas de vid por embriogenesis somatica en tres variedades de uva de mesa (crimson seedless, sugraone y don mariano). El tipo de explanto (anteras u ovarios), la adicion al medio de cultivo de carbon activo y la morfologia de los embriones somaticos diferenciados a partir del callo embriogenico son los tres factores que mas han afectado a la eficiencia del protocolo de regeneracion. Una vez obtenido callo embriogenico y establecido el protocolo de regeneracion, se abordo la transformacion de celulas vegetales mediante agrobacterium en las variedades crimson seedless y sugraone. El establecimiento de un procedimiento de transformacion con una alta eficiencia se dividio en tres fases: 1,- Establecimiento de la concentracion idonea del antibiotico kanamicina. Los experimentos realizados mostraron que los callos embriogenicos de crimson seedless y sugraone mostraron diferente sensibilidad a la kanamicina. Mientras que en la variedad crimson seedless se inhibio la diferenciacion de embriones somaticos con 20 mg/l de kanamicina, en la variedad sugraone fueron necesarios 50 mg/l. 2,- Influencia de la cepa de agrobacterium y la densidad de inoculo. Los estudios de transformacion se abordaron con dos cepas de agrobacterium distintas (EHA 105 y C58(pMP90)). Asi mismo ambas cepas se utilizaron a distintas densidades de inoculo (DO600 = 0,06 y 0,2). En todos los casos la cepa EHA 105 mostro mas eficiencia y se demostro que la densidad de inoculo mas eficiente era diferente segun la varie