捻转血矛线虫雌、雄成虫galectin基因的克隆、鉴定及序列分析

根据GenBank中发表的捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)雌、雄混合虫体的半乳糖结合凝集素(galectin)基因序列设计1对引物,分别以山羊捻转血矛线虫雌、雄成虫的总RNA为模板,采用RT-PCR技术,均扩增出约880 bp的产物.将其分别克隆入pMD1 8-T载体,经双酶切鉴定、PCR鉴定及DNA序列测定,表明扩增片段为捻转血矛线虫galectin cDNA.经核苷酸序列、氨基酸序列和抗原性比较分析发现,雌、雄成虫的galectin基因存在一定差异,在开放阅读框内二者有3个核苷酸的差异,2个氨基酸的差异.与已发表的其它galectin相比,雌、雄成虫的galectin与Hco-gal-3b的同源性最高.二级结构及蛋白质特性预测分析发现,雌、雄成虫的galectin均具有α螺旋、β折叠和β转角,雌虫的galectin蛋白比雄虫的分别多出一个α螺旋和β折叠区.二者的亲水性存在一定差异,但抗原性几乎无差异,且抗原表位比较集中.如同其它galectin一样,在雌、雄成虫的galectin蛋白的N末端不存在信号肽序列.