The molecular mechanism of PML in inducing apoptosis of bladder cancer cell line

目的 探讨生长抑制因子(PML)诱导膀胱肿瘤细胞凋亡的分子机制.方法应用脂质体Lipofectamine2000分别将重组可诱导表达的真核表达载体PMEP4/PML和对照PMEP4空载体转染到膀胱肿瘤细胞系UM-UC-2中,300 μg/ml 潮霉素B筛选稳定表达PML的抗性克隆.激光共聚焦检测PML蛋白表达.DNA ladder法检测肿瘤细胞凋亡.Western印迹法检测凋亡相关蛋白表达情况.结果经5 μmol/L的CdSO4诱导表达后,激光共聚焦显微镜观察发现转染PMEP4/PML组的细胞核内有散在的斑点样的黄绿色荧光亮点,而转染空载体PMEP4组细胞未见特异性的荧光斑点表达.DNA梯度法显示转染PML细胞在诱导PML表达后24 h出现梯状凋亡条带.Western印迹法检测凋亡相关蛋白半胱氨蛋白水解酶3、活化PARP上调,而survivin的表达水平下调.结论 PML诱导膀胱肿瘤细胞凋亡可能与上调半胱氨蛋白水解酶3、活化PARP蛋白,抑制survivin的表达有关。