Implementation of a PCR-based method for the diagnosis of Ehrlichia spp, in canine in Medellin (Colombia)

Ehrlichiosis is a worldwide illness, endemic in tropical and subtropical countries where seroprevalence can reach up to 33% as it is the case in Mexico and Israel. However, the low sensitivity of the serological tests used for diagnosis, 67% in tests with IFI, has led to a required searching for new alternatives to diagnose the disease quickly and effectively. PCR is one of these techniques that could provide high sensitivity and specificity. The target of this study was to implement the PCR test for the diagnosis of Ehrlichia spp., on blood samples from animals with suspected illness from veterinary clinics in the city of Medellin. 90 samples were taken, 33 samples from animals suspected of having symptoms and 57 from healthy animals as probable negatives. DNA from the Madrid strain was used as a positive control. The PCR was performed using as an example the protocol suggested by Aguirre et al (2004). EEC and ECB primers reported by Dawson et al (2004) were used (aqui el propio texto en espanol no esta claro). In this study the 500pb band was amplified, corresponding to the 16s rRNA of Ehrlichia spp., in 11 samples of the animals with suspected illness, obtaining a presentation rate of 33.3%, confirming the presence of bacteria in the animals of the environment, and achieving the implementation of PCR for Ehrlichia spp. as a diagnostic tool in the city.(AU) La Ehrlichiosis es una enfermedad de distribucion mundial, es endemica en los paises tropicales y subtropicales en donde la seroprevalencia puede llegar a ser hasta del 33%, como en Mexico e Israel. La baja sensibilidad de las pruebas utilizadas para el diagnostico, 67% en las pruebas con IFI, han llevado a la necesidad de buscar nuevas alternativas que permitan diagnosticar la enfermedad de manera rapida y eficaz. La PCR es una de estas tecnicas que podria ofrecer una alta sensibilidad y especificidad. El objetivo de este trabajo fue implementar la prueba de PCR, para el diagnostico de Ehrlichia spp., en muestras de sangre de caninos sospechosos provenientes de consultorios veterinarios de la ciudad de Medellin. Se tomaron 90 muestras, 33 de animales sospechosos de ehrlichiosis por sintomatologia, y 57 de animales sanos como probables negativos. Se utilizo como control positivo el ADN de la cepa Madrid. La PCR fue realizada utilizando como ejemplo el protocolo sugerido por Aguirre et al. (2004). Se utilizaron los primers EEC y ECB reportados por Dawson et al. (1994). En este estudio se logro amplificar la banda de 500 pb correspondientes al gen 16s ARNr de Ehrlichia spp., en 11 muestras de los animales sospechosos, obteniendo una frecuencia de presentacion del 33,3%, confirmando la presencia de la bacteria en los animales de nuestro medio, y logrando la implementacion de PCR para Ehrlichia spp. como herramienta diagnostica en nuestra ciudad.(AU) A ehrlichiose e uma doenca em todo o mundo, e endemica em paises tropicais e subtropicais, onde a soroprevalencia pode atingir ate 33%, como no Mexico e Israel. A baixa sensibilidade dos testes utilizados para o diagnostico, 67% nos testes de IFI, levaram a necessidade de buscar novas formas de diagnosticar a doenca de forma rapida e eficaz. PCR e uma tecnica de tal forma que poderia fornecer alta sensibilidade e especificidade. O objetivo deste trabalho foi implementar o teste de PCR para o diagnostico de Ehrlichia spp., Em amostras de sangue de caes suspeitos de clinicas veterinarias da cidade de Medellin. Demorou 90 amostras, 33 amostras de suspeitos que apresentavam sintomas de erliquiose e 57 animais saudaveis como negativo provavel. Foi utilizado como controle positivo de ADN a partir da estirpe de Madrid. A PCR foi padronizada utilizando o exemplo do protocolo proposto por Aguiar et al. (2004). Utilizou-se primers BCE CES e relatado por Dawson et al. (1994). Neste estudo foram amplificados de banda de 500 pb para o gene 16S rRNA do genero Ehrlichia em 11 amostras de animais suspeitos, a obtencao de uma taxa de apresentacao de 33,3%, o que confirma a presenca de bacterias em animais nosso meio ambiente e obter a implementacao de PCR por Ehrlichia spp. como uma ferramenta de diagnostico em nossa cidade. (AU)