重组真核表达载体pEGFP-N1／PDGF-A的构建及真皮干细胞的转染

目的克隆血小板衍生生长因子A链(platelet-derived growth factor A chain,PDGF-A)基因,以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP) 载体pEGFP-N1为骨架,携带PDGF-A基因进入真皮间充质干细胞(dermis-drived mesenchymal stem cells, DMSCs),为采用转入PDGF-A基因的DMSCs修复创面奠定基础.方法采用RT-PCR二步分离法,以人肝癌细胞系(SMC-7721)的总RNA为模板,扩增PDGF-A基因的全长cDNA编码序列,克隆入载体pMD18-T,随后又将PDGF-A基因亚克隆入pEGFP-N1载体中,构建PDGF-A基因的真核表达载体pEGFP-N1/PDGF-A,并采用Fugene 6介导转染技术将PDGF-A基因导入DMSCs. 结果克隆到PDGF-A基因的全长cDNA序列,经测序验证,其序列与GenBank所报告的该基因的序列完全一致.结论成功地将PDGF-A基因克隆到pEGFP-N1载体中,并实现了PDGF-A基因在DMSCs的表达.