Etude des xénorécepteurs CAR (NR1I3) et PXR (NR1I2) : identification d’un nouveau gène cible de CAR (SPOT14) et d’une nouvelle isoforme de PXR (PXR-small) dans l'hépatocyte humain

CAR (Constitutive Androstane Receptor, NR1I3) et PXR (Pregnane X Receptor, NR1I2) sont deux recepteurs nucleaires dedies a la reconna issance et a l'elimination de molecules lipophiles potentiellement toxiques pour l'organisme. Ces facteurs de transcription peuvent etre actives par des ligands d'origines et de structures diverses (medicaments, polluants environnementaux, produits de l'alimentation et de phytotherapies). L'activation de ces recepteurs entraine l'expression des genes majeurs de la fonction de detoxication entero-hepatique (CYP450, transferases, transporteurs) permettant l'elimination de ces toxiques. Dans ce travail, nous avons dans un premier temps 1) montre que CAR controle l'expression de Spot14, une proteine pro-lipogenique, et 2) nous avons identifie une nouvelle isoforme de PXR (PXR-small) codant uniquement pour le domaine de liaison des ligands de PXR. Nous avons pu determiner les origines de transcription par 5'-RACE PCR et montrer que PXR-small represente environ 10% de l'ensemble des transcrits de PXR dans le tissu hepatique sain par une approche de PCR qua ntitative. Nous avons pu detecter sa presence par western-blot sur des extraits de proteines nucleaires issus de tissus hepatiques et de lignees cellulaires hepatiques. Par des experiences de gel retard, nous avons observe que cette nouvelle isoforme tronquee, qui ne code que pour le LBD de PXR, ne peut pas se lier a l'ADN. Des experiences de genes rapporteurs suggerent que cette isoforme se comporte comme un dominant negatif de PXR. Enfin, la presence d'un ilot CpG situe juste en amont de PXR-small suggere que cette nouvelle isoforme pourrait etre regulee epigenetiquement par methylation, notamment dans les cellules tumorales.