Comparación de dos protocolos de extracción de ADN de Trypanosoma cruzi cultivados en medio axénico

Objetivos. Comparar dos protocolos de extraccion de ADN de Trypanosoma cruzi para su uso en la amplificacion de ADN de minicirculos de kinetoplasto (ADNk) mediante la tecnica de Reaccion en Cadena de Polimerasa (PCR). Materiales y metodos. Se cultivaron epimastigotas de T. cruzi en condiciones exenicas obteniendose masas entre 1,5 hasta 100 x 10(6) parasitos. A partir de estas se procedio a la extraccion de ADN mediante dos protocolos: extraccion con solventes organicos (fenol/cloroformo), y empleo de resina (Chelex®100), a partir de los diferentes sedimentos parasitarios. La concentracion y pureza del ADN se determino por espectrofotometria y la integridad se evaluo mediante electroforesis en geles de agarosa. Se realizo el analisis de varianza y comparaciones de medias mediante la prueba de Tukey, utilizando el software Statistix 8.0. Resultados. Se realizaron diez extracciones de ADN de cada una de las diferentes cantidades de parasitos sedimentados. En la extraccion de ADN con la resina Chelex®100 se obtuvo mayor rendimiento, pero menor pureza e integridad respecto a la extraccion con solventes organicos. Sin embargo, permitio la amplificacion del producto de 330 pb de ADNk de T. cruzi. Conclusiones. Aun cuando la tecnica de Chelex®100 proporciono menor pureza e integridad del ADN, permitio la amplificacion con exito de ADNk por PCR, evitando el uso de tecnicas laboriosas y solventes organicos toxicos