鸡MDV L-meq基因与该病毒感染的鸡胚成纤维细胞中p53基因的相

目的探讨鸡马立克病病毒（Marek disease virus,MDV）L-meq基因与MDV感染的鸡胚成纤维细胞（Chicken em-bryo fibroblast,CEF）中p53基因的相关性。方法双酶切质粒pMD18-T-L-meq,获得L-meq基因片段,克隆入载体pcDNA3.1（＋）,构建重组真核表达质粒pcDNA-L-meq,转染CEF细胞,利用实时定量RT-PCR检测转染细胞中p53基因mRNA的表达量,TRAP法检测转染细胞中端粒酶的活性,流式细胞术检测转染细胞细胞周期的变化。结果重组真核表达质粒pcDNA-L-meq经双酶切鉴定构建正确。转染L-meq基因后48 h,CEF细胞中p53基因mRNA的表达量略有升高,72 h时下降。转染L-meq基因后48、72 h,CEF细胞的端粒酶活性比未转染的CEF细胞分别高16、1个活力单位。转染L-meq基因后48 h,CEF细胞G0/G1期比例较转染空载体pcDNA3.1（＋）的细胞（对照）显著增加（P〈0.01）;转染后72 h,实验组G0/G1及G2/M期细胞比例较对照组显著增加（P〈0.01）;转染后48和72 h,S期细胞比例较对照组均显著减少（P〈0.01）。结论 L-meq基因对MDV的增殖具有一定程度的抑制作用,在病毒的增殖过程中可能为一种转录抑制因子。