ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНЫХ СЕРПИНОВ В3 И B4 И ИССЛЕДОВАНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ ИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ С АНТИТЕЛАМИ НА БИОЛОГИЧЕСКОМ МИКРОЧИПЕ

Цель настоящей работы — получение рекомбинантных антигенов плоскоклеточных карцином (серпинов В3 и B4) и изучение их взаимодействия с различными моноклональными антителами на гидрогелевом биологическом микрочипе (биочипе). Для этого созданы кодирующие эти антигены нуклеотидные конструкции и получены полноразмерные рекомбинантные белки серпин B3 (SPB3) и серпин B4 (SPB4), содержащие His6-группы на N-конце. Были наработаны моноклональные антитела H3, C5, H5, H81 и G9 против серпина B3. Создан биочип, в различных ячейках которого иммобилизованы антитела против SPB3, коммерческие моноклональные антитела SCC107 и SCC140 к белку, который вырабатывается клетками плоскоклеточного рака — SCCA, а также рекомбинантные белки SPB3 и SPB4. На основании их специфичного связывания с моноклональными антителами против SCCA, которые, по данным производителя, распознают конформационные эпитопы как SPB3, так и SPB4, сделан вывод о том, что полученные серпины B3 и B4 обладают правильной третичной структурой. Прямой иммуноанализ на биочипе показал, что SPB4 эффективно связывается только с антителами SCC107 и SCC140, тогда как SPB3 специфически взаимодействует как с этими антителами, так и с моноклональными антителами H3 и C5. При использовании сэндвич-анализа на биочипе обнаружена пара антител — SCC107/C5, которая специфично взаимодействует только с SPB3 и не взаимодействует с SPB4. Таким образом, мы показали возможность селективного определения на биочипе серпина B3 в присутствии гомологичного ему серпина B4.