Biological effect of hepatocyte growth factor gene transfection to rat cerebral ischemic model: the experimental study

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)基因转染大鼠急性脑卒中模型后的表达情况及其生物学效应.方法 39只实验用大鼠,线栓法制备成可控性急性大鼠脑卒中模型.利用基因重组技术将HGF基因与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因标记的真核表达载体PIRES2-EGFP进行融合,构建真核细胞表达质粒.通过脂质体介导法,立体定向下多点注射到大鼠急性脑卒中模型的缺血半暗带区域行基因转染,转染7 d后断头取大鼠脑组织,切片观察HGF基因在大鼠脑内的表达情况;并采用兔抗人Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体对大鼠脑组织进行免疫组化染色,显微镜下随机检测5个高倍视野下缺血半暗带区血管数量;同时在基因转染前及转染后7 d,应用CT灌注扫描对实验鼠脑血流量进行监测,观察基因转染对脑血流量的影响.将大鼠脑卒中模型随机分成3组(每组13只):(1)注射脂质体/pIRES2-EGFP-HGF质粒的实验组;(2)注射脂质体/PIRES2-EGFP空载质粒的空载体对照组;(3)空白对照组(未进行注射).结果 酶切鉴定及基因测序证实,HGF基因片段已克隆到PIRES2-EGFP的BamH I和Sal I位点之间.HGF基因转染大鼠缺血半暗带区7 d后,利用荧光显微镜观察可见到绿色荧光蛋白的表达,用免疫组化方法进一步证实了HGF的表达.实验组大鼠转染局部血管数量(46.71±7.11)条/5个高倍视野,明显多于对照组的(20.43±3.21)条/5个高倍视野和空白对照组的(18.00±3.27)条/5个高倍视野(F=74.447;P＜0.01);CT灌注显示其梗死侧大脑半球的脑血流量(63.82±6.08)%也高于对照组(53.58±4.19)%和空白对照组(52.46±4.93)%(F=10.445;P＜0.01).结论 脂质体转染HGF基因能够在缺血半暗带区表达,表达产物能够发挥生物学效应,促进局部血管侧支循环形成。