Bcl-x mRNA前体剪接转换寡核苷酸诱导胶质瘤细胞凋亡的实验研究*

目的：探讨Bcl-xmRNA前体剪接转换寡核苷酸（Bcl-xsplice-switching oligonucleotides，Bcl-xsso）对胶质瘤细胞株U251增殖和凋亡的影响。方法：设计靶向Bcl-X基因下游选择性5’端剪接位点的Bcl-xSSO，B-globinSSO作为阴性对照SSO。SSO经2’-甲氧乙基（2＇-O-methoxyethyl，MOE）、全硫代磷酸化（phosphorothioate，PS）修饰。采用阳离子脂质体将不同的SSO转染至U251细胞。采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）检测Bcl-xSSO对U251细胞的增殖抑制率。流式细胞术定量检测U251细胞的凋亡率。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测Bcl-xSSO对Bcl-xL、Bcl-xSmRNA表达水平的影响，Westernblot方法检测Bcl-xSSO对Bcl-xL、Bcl-xS蛋白表达的影响。结果：MTY结果显示Bcl-XSSO显著抑制U251细胞的增殖，且抑制作用呈剂量依赖性。流式细胞术检测Bcl-XSSO能够明显促进U251细胞凋亡。RT-PCR检测Bcl-XSSO处理组Bcl-xLmRNA表达水平下降，Bcl-xSmRNA表达水平升高。Westernblot检测Bcl-XSSO处理组Bcl-xL蛋白表达水平下降，Bcl-xS蛋白表达水平升高。结论：在胶质瘤细胞U251中，Bcl-xSSO可特异性的作用于Bcl-XmRNA前体，调节其选择性剪接模式从Bcl-xL转换至Bcl-xS，进而促进U251细胞凋亡。．