人Aurora B基因的克隆、原核表达及生物信息学分析

目的：克隆出人AuroraB基因，并将其于大肠杆菌Rosetta（DE3）菌株中表达，获得重组蛋白。方法：利用TRIzolReagent法提取食管癌ECa109细胞总RNA，lit-PCR后以其cDNA为模板PCR扩增AuroraB基因，构建pET28a（＋）-AuroraB重组质粒，将其转化Rosetta（DE3）菌株，IPTG体外诱导表达重组蛋白。利用生物信息学工具对AuroraB的核酸序列和蛋白功能结构进行分析。结果：成功构建了pET28a（＋）-AuroraB重组质粒，经序列比对，与GenBank上公布的人AuroraB基因序列同源性达到了99％；获得AuroraB蛋白，大小约39kDa，蛋白表达量约占菌体总蛋白的28％。结论：对人AuroraB基因进行克隆、原核表达及生物信息学分析，为深入研究AuroraB在细胞周期调控中的作用机制及后续AuroraB抑制剂的体外筛选奠定基础。