重组蛋白TATm-Survivin（T34/117A）对乳腺癌细胞周期变化与凋亡的影响

背景与目的：Survivin是一个抗凋亡、促增殖的双功能基因,且高表达于多种恶性肿瘤和转化组织中,使其成为抗肿瘤药物研究的新靶点。本研究观察经点突变的重组蛋白药物TATm-Survivin（T34/117A）处理乳腺癌细胞B-Cap-37后,对乳腺癌细胞B-Cap-37细胞周期和增殖的影响,检测其对癌细胞促凋亡且抑制增殖的药效并初步探讨其分子机制。方法：重叠PCR法在TATm-Survivin（T34A）基因上引入突变位点Thr117→Ala117,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期及线粒体膜电位变化;Western blot检测Aurora B激酶底物Histone H3的磷酸化水平和Caspase-3激活情况。结果：TATm-Survivin（T34/117A）蛋白对B-Cap-37细胞的增殖有显著的抑制作用;作用24 h后,细胞被阻滞在G0/G1期,G0/G1期细胞由对照组的（54.1±6.1）%显著增加到（62.7±5.1）%（P〈0.05）,作用48 h后,细胞被阻滞在G2/M期,G2/M细胞由对照组的（16.6±8.9）%显著增加到（24.0±6.0）%;Aurora B激酶活性通过Histone H3的磷酸化水平间接反映,蛋白药物处理48 h后p-Histone H3的灰度值由对照组的100%降低到89.8%（P〈0.05）;48 h时,细胞线粒体膜电位由对照组的（649.9±8.0）%显著降低到（582.9±15.6）%（P〈0.05）;细胞凋亡率由对照组的（4.6±0.7）%显著增加到（42.7±0.5）%（P〈0.01）,与对照相比,不同浓度的重组蛋白均激活了Caspase-3。结论：重组蛋白TATm-Survivin（T34/117A）对乳腺癌B-Cap-37具有抑制增殖、促凋亡作用,其与降低Aurora B激酶的活性,并激活Caspase-3相关。