Caracterización del operón PP2810-13 en Pseudomonas putida

Motivacion: El genero Pseudomonas se encuentra en una gran diversidad de nichos ecologicos, debido a su gran versatilidad metabolica, es capaz de degradar contaminantes del tipo  compuestos organicos, etc. Su estudio nos puede abrir las puertas hacia el desarrollo de estrategias con aplicacion ambiental, industrial, etc. Nosotros nos centraremos en Pseudomonas putida , su genoma esta secuenciado, y es inocuo (GRAS). Aproximadamente un 10% de sus genes participan en la transduccion de senales y la regulacion de la expresion; algunos de estos pertenecen a sistemas de dos componentes(1) permitiendo  acoplar un estimulo-respuesta haciendo que el organismo pueda responder ante cambios en el ambiente, formando una compleja red de regulacion. Uno de los sistemas de dos componentes, exclusivo de Pseudomonas es el sistema CbrAB, donde CbrA es la proteina sensora y CbrB es un regulador transcripcional dependiente de σ54. En estudios anteriores se observo mediante ChIP- Seq(no publicado)  que el gen PP2810 era candidato a estar regulado por este sistema de dos componentes, y su region promotora tiene tres posibles sitios de union para CbrB. Metodos: Se analizara la expresion como medida de la actividad β-galactosidasa para fusiones  transcripcionales de la region promotora  del  gen PP2810 a lacZ  tanto silvestre como con modificaciones en los sitios de union  en dos  fondos: silvestre y mutante carente de cbr B. Ademas se realizaran ensayos de union  de la proteina CbrB a la region promotora silvestre y  mutante. Tambien se construira un  mutante por insercion en el primer gen del operon de un casete de Kanamicina y se realizara un analisis fenotipico en  medio minimo con distintas  fuentes de carbono, antibioticos y metales(3). Resultados: Los resultados muetran que CbrB activa transcripcionalmente el gen PP2810 y que la contribucion de los subsitios es diferente para cada uno de ellos. En los ensayos de union se aprecio diferencias que correlacionan con los datos obtenidos mediante los ensayos de actividad β-galactosidasa.  No se han obtenido diferencias significativas  todavia del mutante de insercion en los ensayos realizados, aunque esta parte se encuentra en desarrollo. Conclusiones: El operon PP2810-13 parece esta regulado por CbrB, pero hay que seguir trabajando en la busqueda de un fenotipo asociado a este operon.