جداسازی، کشت و شناسایی سلولهای بنیادی مزانشیمی مغز استخوان سگ

هدف از این مطالعه جداسازی، تکثیر و شناسایی سلول­های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان سگ بود. بدین منظور نمونه خون مغز استخوان 15 قلاده سگ نر بالغ جمع­آوری گردید و پس از سانتریفیوژ، سلول­های تک­هسته­ای جدا­شده در محیط استاندارد کشت داده شدند. سلول­های چسبنده به محیط کشت جدا گردیده و پس از سه بار پاساژ ماهیت مزانشیمی آنها با استفاده از مرفولوژی سلولی، ارزیابی آنتی­ژن­های سطحی و تمایز به رده سلول­های استخوانی و چربی مورد تأیید قرار گرفت. پس از 4 روز کشت، سلول­های دوکی شکل شبیه فیبروبلاست یا همان سلول­های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان ظاهر گردید و با گذشت زمان بر تعداد آنها افزوده شد و تراکم سلولی افزایش پیدا کرد. میانگین مدت زمانی که طول کشید تا سلول­ها به تراکم بیش از 75 درصد در پاساژ سوم برسند، برابر با 75/5±89/22 روز بود. نتایج آنالیز فلوسیتومتری نشان داد که این سلول­ها از نظر بیان شاخص­های CD34 و CD45 منفی بوده و در مقابل بیان شاخص­های CD44 و CD105 آنها مثبت بود. کشت در محیط­های القایی استئوسیتی و آدیپوسیتی به مدت یک ماه منجر به تبدیل شدن این سلول­ها به رده­های سلولی استخوانی و چربی گشت که نشانگر قدرت تمایز این سلول­ها می­باشد. افزایش بیان ژن­های VDR، COL1A1، BGLAP و SPARC نشانگر تمایز سلول­های بنیادی مزانشیمی جداشده از مغز استخوان سگ به سلول­های استخوانی در محیط کشت القایی می­باشد. این یافته­ها می­تواند مبنایی برای انجام مطالعات بالینی آتی به­ویژه در ارتباط با نوزایش بافت­های استخوانی و غضروفی با استفاده از سلول­های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان سگ باشد.