DESENVOLVIMENTO DE NOVOS MICROSSATÉLITES LOCALIZADOS NA REGIÃO XP21.2-XP21.1 PARA O DIAGNÓSTICO INDIRETO DE DISTROFIA MUSCULAR DE DUCHENNE

A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) e a doenca genetica com padrao de heranca recessiva ligada ao sexo mais frequente, causada por mutacoes no gene DMD. O diagnostico indireto de portadores pode ser feito mediante analise de ligacao de marcadores do tipo Repeticoes Curtas em Tandem (STR). Atualmente sao usados STR dinucleotideos, que compromete a designacao dos alelos. O objetivo foi desenvolver marcadores STR tetra- e pentanucleotideos para o diagnostico indireto de portadores da DMD. Foi realizada a mineracao in silico de novos STR tetranucleotideos e pentanucleotideos na regiao Xp21.2-p21.1 utilizando ferramentas de bioinformatica. O indice potencial de polimorfismo foi determinado in silico pela validacao comparativa de banco de dados de 3 genomas de referencia. Marcadores selecionados foram utilizados no desenvolvimento de um ensaio multiplex da Reacao em cadeia da Polimerase Quantitativa de Fluorescencia (QF-PCR). Foram desenvolvidos 13 marcadores ineditos, intronicos em DMD, compreendidos em uma regiao de 1,95 Mb (distância genetica 8,8 cM). A designacao alelica dos novos marcadores por tipagem de DNA de individuos nao afetados foi realizada de maneira acurada, mostrando maior precisao em diagnostico indireto. O ensaio multiplex foi testado em cinco familias com acometidos pela DMD, e a analise permitiu a identificacao indireta dos cromossomos dos individuos portadores de mutacao causadoras da DMD nestas familias. Atraves da analise de ligacao, utilizando os novos marcadores, foi possivel identificar portadoras da mutacao pela identificacao dos alelos do individuo acometido. Os 13 marcadores foram validados e mostraram ser altamente informativos para utilizacao em diagnostico indireto.