转染lncRNA Gm15638的小鼠肾小球系膜细胞中FN、Col I表达变化

目的观察转染长链非编码RNA（lncRNA）Gm15638的小鼠肾小球系膜细胞SV40-MES13中纤维化标志物纤维连接蛋白（FN）和Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）的表达变化。方法采用PCR法扩增lncRNA Gm15638片段,并将其插入p CDH-CMV-MCS-EF1-cop GFP载体,构建重组慢病毒载体p CDH-Gm15638。用转染试剂将重组目的质粒p CDH-Gm15638与包装质粒ps PAX2和包膜质粒p MD2.G共同转染293T细胞,收集重组慢病毒悬液,测定病毒滴度。将SV40-MES13细胞分为实验组和对照组,分别转染p CDH-Gm15638和慢病毒空载体p CDH-Mock。转染48 h后采用real-time PCR法检测Gm15638验证p CDH-Gm15638转染情况;提取细胞总蛋白,采用Western blotting法检测FN、ColⅠ。结果双酶切鉴定和测序结果显示,重组慢病毒载体p CDH-Gm15638构建成功。通过三质粒包装获得重组慢病毒,测得病毒滴度约6×10^7efu/m L。实验组、对照组细胞中Gm15638相对表达量分别为867、1,两组相比,P〈0.05。实验组细胞中FN、ColⅠ相对表达量分别为0.739、1.08,对照组分别为0.48、0.845,两组相比,P均〈0.05。结论转染Gm15638的SV40-MES13细胞中纤维化标志物FN、ColⅠ表达水平下调。