野生型蛋白激酶GIα腺病毒抑制低氧肺动脉平滑肌细胞表型转换及细胞增殖

目的 观察携带野生型蛋白激酶GIα腺病毒（Ad-PKGIα）抑制低氧诱导人肺动脉平滑肌细胞（PASMC）表型转换及其增殖的影响，探讨其在低氧肺血管重建（HPVR）中的作用。方法 组织块法建立人PASMC细胞系。Ad-PKGIα转染PASMC；采用荧光显微镜观察转染效率；RT-PCR、Westernblot检测PASMC中PKGIαmRNA表达、Ad-PKGIα转染对低氧PASMC表型转换中平滑肌α肌动蛋白（SM-α-actin）表达的影响。流式细胞仪检测Ad-PKGIα转染后低氧对PASMC细胞周期的影响；3H-TdR掺入法检测PASMC增殖。结果 （1）Ad-PKGIα转染后PASMC中PKGIαmRNA水平、磷酸化PKGIα蛋白水平显著增高。（2）常氧时PASMC中SM-α-actin蛋白表达为44.25±5.34；3％O2处理12hPASMC中SM-α-actin蛋白表达水平降至32.18±4.19，处理24hSM-α-actin蛋白表达水平降至21.90±2.44。（3）低氧条件下，PASMC开始增殖，随着低氧时间延长，PASMC增殖逐渐增加，至24hPASMC增殖最多。与未转染对照组、腺病毒空载体组比较，Ad-PKGIα转染组PASMC增殖明显受到抑制。（4）低氧使未转染对照组和腺病毒空载体组的PASMC进入有丝分裂期，随着低氧时间延长，G0/G1期细胞比例逐渐减少，S＋G2/M期细胞比例逐渐增加。Ad-PKGIα转染后常氧状态下PASMCG0/G1期细胞比例下降、S＋G2/M期细胞比例上升趋势均明显减缓。结论PKGIα基因在低氧肺血管重建信号转导途径中有重要的调节作用，可作为基因治疗的靶点之一。