PCR-SSP tekniğine dayalı laboratuvar yapımı HLA-B*27 optimizasyonu ve test kiti geliştirilmesi

A Amac: Calismada Ankilozan spondilit ve diger spondiloartropatilerin molekuler tanisinda kullanilmak uzere guvenilir, ekonomik ve rutin kullanima uygun laboratuvar yapimi (in-house) HLA-B*27 PCR-SSP tani kiti gelistirilmesi amaclanmistir.  Gerec ve Yontem: Calismaya, ticari kitler kullanilarak HLA-B*27 pozitif olarak saptanan 119 ve negatif olarak saptanan 446 olmak uzere toplam 565 olgu dahil edildi. HLA-B*27 tipleme icin sekansa spesifik primerler ve beta globin gen bolgesinden yararlanilarak dizayn edilen internal kontrol primer cifti kullanilarak PCR optimizasyonu gerceklestirildi.  Bulgular: HLA-B*27’si pozitif olan olgularda, %2’lik agaroz jelinde 273 bc internal kontrol bandinin ilerisinde 149 bc’lik spesifik bant olmak uzere cift bant, B*27 negatif hastalarda ise sadece 273 bc’lik internal kontrol bandi saptandi. Ticari kitler kullanilarak HLA-B*27’si pozitif olarak saptanan 119 ve negatif olarak saptanan 446 bireyin sonuclari ile tarafimizdan gelistirilen PCR-SSP kiti kullanilarak elde edilen sonuclarin tamamen uyumlu olmasi nedeniyle sensitivite ve spesifite %100 olarak belirlendi. Gelistirdigimiz laboratuvar yapimi PCR-SSP kitinin maliyetinin, ticari kitlere gore en az 50 kat daha ucuz oldugu goruldu.  Sonuc: Ticari kitler kullanilarak HLA-B*27’si pozitif olarak saptanan 119 ve negatif olarak saptanan 446 olgunun tamaminda, gelistirdigimiz yontemle de birebir uyumlu sonuclar elde edildi. Bu bulgular gelistirdigimiz kitin guvenilir, ekonomik ve rutin kullanima uygun oldugunu gostermektedir.