肝星状细胞条件培养基对肝癌细胞PLC／PRF／5耐药性的影响及其机制

目的：探讨肝星状细胞条件培养基（hepatic stellate cell conditioned medium，HSC—CM）对人肝癌PLC／PRF／5细胞耐药性的影响及其可能的机制。方法：用无血清RPMI1640培养肝星状细胞LX-2，使其在缺营养的环境下活化，收集其条件培养上清即为HSC—CM。PLC／PRF／5细胞在HSC—CM条件下培养24h后，顺铂处理12h或24h，采用流式细胞术检测PLC／PRF／5细胞的凋亡情况，MTF法检测PLC／PRF／5细胞的增殖，real—timePCR检测PLC／PRF／5细胞上皮间质转化（epithelialmesenchymaltransition，EMT）相关基因的表达水平。结果：顺铂组12和24h两个时间点PLC／PRF／5细胞的凋亡率为（22．344±1．12）％和（26．784±1．56）％；HSC—CM＋顺铂组细胞的凋亡率为（17．224±1．42）％和（21．52±1．76）％，顺铂组细胞凋亡率显著高于HSC—CM＋顺铂组（P〈0．05）。同在这两个时间点，顺铂组和HSC-CM＋顺铂组PLC／PRF／5细胞的增殖活性分别为（68．65±2．56）％和（79．474±1．43）％，（46．54±3．65）％和（62．774-2．89）％，HSC-CM＋顺铂组细胞增殖活性均高于顺铂组（P〈0．05）。Real—timePCR结果显示，与顺铂组相比较，HSC—CM＋顺铂组PLC／PRF／5细胞中上皮标记物钙黏蛋白（E—cadherin）的表达下降（P〈0．05），而间质细胞标记物神经黏附素（N—cadherin）、波形蛋白（vimentin）以及EMT相关转录因子Snail和ZEBl的表达显著上调（P〈0．01）。结论：HSC—CM可能通过诱导PLC／PRF／5细胞发生EMT，从而增强PLC／PRF／5细胞对顺铂的抵抗作用。