Note de laboratoire : Dosage ultra-rapide de la metformine plasmatique par chromatographie liquide d'intéraction hydrophile

La metformine est un biguanide hypoglycemiant largement utilise. Bien que sa marge therapeutique soit grande, une acidose lactique mortelle peut survenir rapidement en cas de surdosage massif. Le diagnostic differentiel de l'acidose est facilite par le dosage de la metformine plasmatique. L'objectif de ce travail est de mettre au point et valider une methode de dosage ultra-rapide de la metformine, petite molecule tres polaire difficile a extraire par les solvants classiques et difficile a doser en CLHP en phase inverse. La methode choisie est la chromatographie d'interaction hydrophile (HydrophILic Interaction Chromatography, HILIC) avec une detection par barrette de photodiodes. La colonne contient une phase stationnaire particuliere, la poly(2-hydroxyethylaspartamide)-silice (colonne PolyHydroxyEthyl A). Elle est thermostatee a 50° C. La phase mobile est un melange acetonitrile/acide phosphorique 65 : 35, v/v, a pH 2,8. Le debit est de 1,5 ml/min. Dans ces conditions, le temps de retention de la metformine est de 2,9 min. Elle est isolee a partir de 250 µl de plasma deproteinise par 15 µl d'acide perchlorique. Le dosage est realise par rapport a une courbe d'etalonnage. Dans ces conditions, le temps de retention de la metformine est de 2,9 min. La methode est lineaire de 0,1 a 400 µg/ml. La limite de detection est 0,02 µg/ml, la limite de quantification de 0,1 µg/ml. Les variabilites sont plus importantes aux faibles concentrations qu 'aux fortes concentrations. La recuperation de la metformine plasmatique est quasiment totale (rendement de 99,5 %). Les autres antidiabetiques oraux ne donnent pas d'interference. L'application a un cas de suicide par ingestion massive de Glucophage® montre une concentration plasmatique de 188 µg/ml, en accord avec l'hyperacidose lactique retrouvee pendant la tentative de reanimation.