pEGFP-N1-ZIP2真核表达载体的构建及对人T淋巴和单核细胞系锌转运体基因表达的影响

目的构建pEGFP-N1-ZIP2真核表达载体,观察其在人T淋巴细胞系Jurkat-E6-1和人单核细胞细胞系THP-1中的表达,并检测ZIP2在两种细胞系中过表达及其对其他锌转运体的影响。方法利用外周血经RT-PCR扩增获得人ZIP2 cDNA序列,将其与pEGFP-N1定向连接,构建完成转染细胞48 h后,通过RT-PCR检测ZIP2过表达情况,并检测ZIP1、ZIP6、ZIP8、ZIP10、ZnT1、ZnT5等锌转运体表达变化。结果经过双酶切鉴定以及测序结果显示目的基因大小、插入方向均正确。在Jurkat-E6-1细胞中,ZIP2过表达使ZnT-1表达显著降低（P〈0.05）,但在THP-1细胞中,ZIP2过表达对其他锌转运体表达没有显著影响。结论成功构建pEGFP-N1-ZIP2真核表达载体,瞬时转染Jurkat-E6-1细胞和THP-1细胞,Jurkat-E6-1细胞中ZIP2过表达使ZnT1表达下调,而THP-1细胞中ZIP2过表达并未对选定的其他锌转运体产生显著影响,两种不同的免疫细胞系中ZIP2过表达对锌转运体家族其他成员影响表现出差异。