过表达miR-26b抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖

目的构建miR-26b过表达载体，观察其对MKN-45人胃癌细胞增殖的影响。方法合成miR-26bDNA寡聚核苷酸单链，经退火形成双链；用限制性内切酶EcoRI和HindIII对pcDNATM6．2-GW-miR真核表达载体进行双酶切（大片段），纯化后与之前退火形成的DNA双链连接，转化至大肠杆菌感受态细胞DH5a，扩增后提取质粒，经DNA测序和BLAST比对，验证其是否构建成功；将成功构建的pcDNATM6．2-GW—miR-26b载体瞬时转染MKN-45人胃癌细胞，采用实时定量PCR检测miR-26b的表达水平，Westernbla法检测细胞分裂周期蛋白6（CDC6）蛋白，MTr法检测细胞增殖的变化。结果通过DNA测序BLAST比对结果显示成功构建了miR-26b的真核表达载体；瞬时转染MKN-45细胞后，实时定量PCR结果显示miR-26b的表达水平显著增加；Westernbla结果表明过表达miR-26b明显抑制CDC6蛋白的表达，MTr法显示过表达miR-26b能显著抑制MKN-45细胞的增殖。结论过表达miR-26b可抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖。