茄子 SmWRKY65 基因克隆及其对青枯病的抗性分析

目的通过克隆SmWRKY65（Solanum melongena L. WRKY65）基因并分析其生物信息学与功能，以期探究SmWRKY65 对茄子青枯病的响应情况。 方法以茄子抗病植株（E-31）为试验材料、叶片cDNA为模板，通过PCR技术获得SmWRKY65 基因，并利用ExPASy ProtParam tool对其进行生物信息学分析。运用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）的方法对其不同组织部位与抗病、感病材料（E-32）中的响应情况进行分析；通过双酶切法构建亚细胞定位载体；运用病毒诱导的基因沉默（virus induced gene silencing, VIGS）技术构建pTRV2-SmWRKY65 载体并侵染茄子抗病植株。 结果在茄子中成功克隆了SmWRKY65 基因，该基因开放阅读框为834个核苷酸序列，编码277个氨基酸残基，在71~131区域具有1个含60个氨基酸的WRKY保守域，定位于细胞核中。时空表达分析发现，SmWRKY65 在茄子根组织中的表达量最高，叶中次之，茎中最低；qRT-PCR分析表明，SmWRKY65 在茄子抗病和感病材料中均响应青枯病菌的诱导上调表达；VIGS结果表明，与清水和pTRV2 空载对照相比，接种青枯病菌后，pTRV2-SmWRKY65 沉默植株的叶片表现出明显的萎蔫症状，结合qRT-PCR分析发现，pTRV2-SmWRKY65 表达量较对照组明显下降。 结论SmWRKY65在茄子抗病材料中的表达水平明显高于感病材料，且pTRV2-SmWRKY65 植株与对照相比表现为易感症状，说明SmWRKY65 沉默后茄子抗青枯病的能力下降，表明SmWRKY65 可能涉及茄子青枯病抗性相关过程的调控。