凡纳滨对虾感染致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌( Vp AHPND )的定量分析

对虾急性肝胰腺坏死病（Acute hepatopancreatic necrosis disease，AHPND）是由致AHPND副溶血弧菌（AHPND-causing Vibrio parahaemolyticus ， Vp AHPND ）携带的pVA1-like质粒所表达的PirA Vp 和PirB Vp 毒力蛋白对对虾肝胰腺的急性毒性所致。本研究用2.19×10 5 CFU/ml Vp AHPND 分离株20130629002S01对凡纳滨对虾（ Litopenaeus vannamei ）进行浸泡感染，于感染后2~9 d采集对虾的肝胰腺、鳃、肠道、肌肉组织，采用实时荧光定量PCR方法，检测各组织中的 pirA Vp 拷贝数。结果显示，感染后凡纳滨对虾各组织均能检测到 pirA Vp ，其中，肝胰腺在感染后第4天达到峰值，为8.71×10 4 copies/mg，而鳃、肌肉、肠道分别在第3、4、5天达到峰值，分别为9.08×10 3 、2.59×10 4 、5.76×10 4 copies/mg。早期感染鳃组织中先出现 Vp AHPND 的富集，在高死亡发生期， Vp AHPND 数量在肝胰腺和肠道出现高峰，在死亡数量逐渐下降的后期，各组织的 Vp AHPND 均快速下降，肠道、肝胰腺和肌肉中的 Vp AHPND 水平趋于接近。对虾肝胰腺组织病理切片显示，同一时间有临床症状的病虾和濒死对虾相比，濒死对虾表现出更严重的AHPND病理特征，且二者的组织病理特征均随着感染时间的延长变得更为严重，但检测到的 Vp AHPND 数量呈下降趋势。研究表明，在 Vp AHPND 感染过程中，组织中的 pirA Vp 基因数量不能代表对虾的发病程度，发病程度及组织病理严重的AHPND样品中 Vp AHPND 的数量不一定处于高水平状态。