LC-MS/MS法测定大鼠血浆中奥贝胆酸的浓度

本文建立了一种快速、灵敏、准确、可靠的LC-MS/MS分析方法测定大鼠血浆中奥贝胆酸浓度，并应用于奥贝胆酸大鼠灌胃给药后的药动学研究。血浆样品以甲基叔丁基醚提取后，经ACE Excel 2 Super C18色谱柱（50 mm×2.1 mm ID，1.7 μm）分离，以乙腈-2 mmol·L -1 甲酸铵水溶液（含10%乙腈）作为流动相，梯度洗脱，流速0.2 mL·min -1 。电喷雾离子化源（ESI）负离子条件下，采用多反应监测模式（MRM）进行定量分析，监测离子对分别为奥贝胆酸 m / z 418.9[M-H] - →401.2，内标甘草次酸 m / z 469.0[M-H] - → 425.2。大鼠血浆中奥贝胆酸在5~5 000 ng·mL -1 浓度内线性关系良好（ r 2 > 0.99），定量下限为5 ng·mL -1 ；日内、日间精密度（RSD）小于9.82%，准确度（RE）在±6.90%以内；血浆中无内源性物质干扰，内标归一化后的基质效应为78.9%~82.5%，提取回收率为85.4%~88.5%；奥贝胆酸的血浆样品经室温放置24 h、-70℃ 3次冻融循环、-70℃冻存1个月，处理后的样品在进样器内放置24 h均稳定；药物浓度超出曲线范围的样品经空白血浆稀释10倍后，其准确度在±11.2%以内，精密度为7.25%。本方法经验证后，成功应用于大鼠灌胃给予奥贝胆酸后的药动学研究。