Target delivery of lactose poly-L-lysine combined HSV-TK to human liver cancer cells

目的 为肝癌的自杀基因治疗寻找新的靶向分子.方法 通过还原氨化法进行乳糖 (Lac)与聚赖氨酸(PLL)共价连接;经Sephadex G-10柱分离纯化;以苯酚-硫酸比色法测定n值;与真核表达质粒r-pAs16Dr按比例混匀,得到GlanPLL-r-pAs16Dr基因转移系统;分别转染不同的细胞株进行体外效应研究:人肝癌细胞株HepG2、人肺癌细胞株549,观察报告基因红色荧光蛋白能否在肝细胞中表达;RT-PCR检测HSV-tk基因的表达情况;观察给予不同浓度的更昔洛韦(GCV)后随时间延长细胞改变情况,用MTT法检测GCV对不同细胞的杀伤作用.结果 化学合成得到34个半乳糖基的PLL;转染后48 h在HepG2可见红色荧光蛋白表达,A549细胞未见红色荧光蛋白表达;RT-PCR证实HSV-tk仅在HepG2细胞中表达;体外杀伤实验显示:经GlanPLL-r-pAs16Dr基因转移系统处理的两种细胞对GCV表现出不同的敏感性.HepG2细胞对GCV很敏感,低浓度的GCV(1 mg/L)处理3 d,即可使细胞生长抑制率达到70.5%,A549对GCV不敏感.结论 半乳糖基多聚赖氨酸能够与ASGPR有效的结合,合成配体来源丰富、制备简单,适合于作为自杀基因HSV-tk肝靶向运送的导向配体。