Etude de la regulation du recepteur de l'anaphylatoxine c5a. Identification de ligands des recepteurs de la famille fpr

Les leucocytes peuvent etre actives par des agents chimioattractants tels que des peptides bacteriens (fmlp) ou la fraction c5a du complement. Ces agents chimioattractants induisent la migration des leucocytes, leur degranulation et l'activation du complexe nadph oxydase qui produit les ions superoxyde impliques dans la destruction des pathogenes. Ces reponses cellulaires sont declenchees par la fixation de ces agents sur des recepteurs specifiques qui appartiennent a la superfamille des recepteurs couples aux proteines g heterotrimeriques. Malgre la presence continue d'agonistes, les reponses cellulaires sont transitoires et les cellules deviennent refractaires a une autre stimulation (desensibilisation homologue). Selon le concept actuel, le recepteur est phosphoryle, ce qui permet son interaction avec la proteine adaptatrice -arrestine. Cette interaction inhibe le couplage recepteur/proteine g et induit l'internalisation du recepteur par les puits recouverts de clathrine. Apres addition de c5a, le recepteur du c5a (rc5a) est phosphoryle sur six serines de la queue c-terminale intracellulaire. En utilisant des recepteurs dont certaines serines ont ete mutees, nous avons montre que : (1) cette phosphorylation suit un processus hierarchique, debutant par la phosphorylation des serines s334 et s332. (2) la phosphorylation de la serine s338 est necessaire au decouplage recepteur/proteine g. (3) le decouplage et l'internalisation de rc5a sont deux processus independants. (4) dans les cellules promyelocytaires hl-60, rc5a peut etre internalise par un mecanisme independant de la phosphorylation. Rc5a peut egalement etre internalise par la voie classique dependante de la phosphorylation. Ces deux mecanismes sont sensibles au dominant negatif de la dynamine, une gtpase qui intervient au niveau de la membrane dans la fermeture des vesicules d'endocytose, suggerant l'implication des puits recouverts de clathrine. D'autre part, nous avons identifie le peptide synthetique wkymvm comme un agoniste des recepteurs fpr, fprl1 et fprl2 ; wkymvm est specifique de fprl1 et fprl2. Un peptide antibacterien produit par helicobacter pylori (hp(2-20)) est egalement un agoniste de fprl1 et fprl2.