VEGF165慢病毒载体的构建及其在人骨髓间充质干细胞中的表达

目的 构建VEGF165慢病毒包装质粒,通过慢病毒介导VEGF165感染入骨髓间充质干细胞(hBMSCs)并验证其表达情况,为高表达VEGF的HBMSCs应用于血管再生和治疗临床创面愈合提供研究基础. 方法 2012年3月至2013年3月,采用聚合酶链式反应(PCR)从提取的人体组织总RNA逆转录扩增VEGF165,经双酶切后与pLVX-IRES-ZsGreen1真核载体连接,在脂质体介导下将重组质粒转染293T细胞,包装产生的病毒液感染HBMSCs,荧光显微镜下观察VEGF165荧光融合蛋白表达,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测VEGF165 mRNA的表达.对结果用SPSS13.0统计软件进行分析,P＜0.05为差异有统计学意义. 结果 双酶切产物于576 bp处出现特异性条带,测序结果与预期符合,表明所构建重组质粒pLVX-IRES-ZsGreen1+VEGF165结构正确.构建质粒转染293T细胞并产生高滴度含目的基因VEGF165的慢病毒,感染hBMSCs后,细胞在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白表达,qRT-PCR结果显示慢病毒感染组VEGF165 mRNA表达水平为32.27±1.05,显著高于对照组(P＜0.05). 结论 成功构建VEGF165慢病毒包装质粒,并感染hBMSC,为其基因治疗应用于临床提供了依据。