普通TaqMan探针及raqMan MGB探针real-time PCR检测无形体msp-2基因方法的建立与比较

目的建立敏感、特异、定量real-time PCR方法,用于无形体病早期诊断及立克次体病鉴别诊断。方法通过GenBank Blast比较分析,选择世界各地39株无形体,以msp-2特异基因保守区设计普通TaqMan探针及TaqManMGB探针并比较分析。结果普通TaqMan探针及TaqMan MGB探针2种方法均具有良好的特异性,除无形体外,遗传亲缘关系较近的其他立克次体目成员（17种）均扩增阴性。临床上其他8种常见致病菌呈阴性扩增。灵敏性评估结果发现普通TaqMan探针及TaqMan MGB探针最低检出浓度分别为102copies/μl及10copies/μl。两种探针方法均具有较好的重复性。结论本研究建立了敏感、特异的无形体早期诊断及立克次体鉴别诊断的荧光定量PCR技术,TaqMan MGB探针灵敏性高于普通TaqMan探针。