Fluorescent dye of CFSE used for labeling tumor cells and determining cytotoxicity

目的 探讨化学染料羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记肿瘤细胞的最佳条件及其在细胞毒检测中的价值.方法 用不同浓度的CFDA-SE标记K562(人红白血病细胞)、YAC-1(小鼠淋巴瘤细胞)、A375(人乳腺癌细胞)、MCF-7(人黑色素瘤细胞)不同肿瘤细胞系,并检测其0～24 h的荧光强度,观察荧光强度变化的时间动力学,选择CFDA-SE标记细胞的最佳浓度;CFDA-SE标记细胞后孵育时间为1～6 h,再用DNA染料碘化丙啶(PI)标记,流式细胞仪分析CFDA-SE和PI双标记细胞,并计算细胞死亡率,研究CFDA-SE对细胞的毒性.CFDA-SE标记时间分别为5、6、7、8、10、15 min,测定标记不同时间的荧光强度和细胞的死亡率,选择最佳标记时间;用CFSE在最佳条件下标记靶细胞进行细胞毒检测实验.结果 对于不同肿瘤细胞系,CFDA-SE标记的最佳浓度不同;CFDA-SE对细胞没有毒性,死亡率低于5%;最佳标记时间为8 min.人外周血单个核细胞和BALB/c鼠脾淋巴细胞对肿瘤细胞K562、YAC-1均表现出杀伤活性,杀伤百分率随效靶比和共孵育时间的增加而增加.最佳效靶比为50∶ 1～25∶ 1,共孵育时间为2～4 h.结论 CFDA-SE具有标记细胞稳定,能用于细胞培养时间较长的研究,不影响细胞功能,适用于流式细胞仪检测细胞毒实验的优点,是一种很好的标记细胞的荧光素染料。