Minimal promoter for the NAD + -specific glutamate dehydrogenase gene of Neurospora crassa

L'expression du gene de la glutamate deshydrogenase specifique du NAD + (GDH-NAD) de Neurospora crassa peut etre reprimee par un catabolite. Afin d'identifier la sequence minimale necessaire a la fonction du promoteur, des sites potentiels de liaison de proteines ont ete recherches dans la region flanquante 5' du gene de la GDH-NAD. Des fragments d'ADN comportant des sequences en amont du codon d'initiation ATG ont ete utilises comme sondes lors de transferts Southwestern de proteines cellulaires totales provenant de cellules cultivees dans des milieux entrainant la repression ou l'induction du gene de la GDH-NAD. Deux polypeptides interagissent differemment avec une sonde du promoteur: un de ces polypeptides est plus abondant dans les cellules reprimees et il y a un taux plus eleve du second polypeptide dans les cellules induites. Des tests de modification de la mobilite electrophoretique utilisant des fragments marques du promoteur montrent qu'ils interagissent preferentiellement avec des proteines se trouvant dans les cellules induites. La sequence en amont comportant les sites potentiels de liaison des proteines a ete fusionnee a la sequence codante de la proteine de fluorescence verte (GFP). Ce plasmide a ete introduit par electroporation dans les microconidies d'un mutant albinos de N. crassa. Une integration stable du plasmide et l'expression de la GFP dans les hyphes et les conidies des transformants ont ete demontrees par transferts Southern et Western et par microscopie en fluorescence.