siRNA对小鼠血管内皮细胞NF-κB p65表达的抑制作用

探索RNA干扰(RNA intefierence，RNAi)技术在抑制血管内皮细胞激活中的应用前景。利用阳离子脂质体Lipofectaminen^TM2000作为转染试剂将化学合成的小鼠NF-κB p65的小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)转染人小鼠EOMA细胞，RT-PCR测定细胞内NF-κB p65 mRNA表达，Western blot检测细胞内NF-κB p65蛋白水平。同时观察siRNA对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的NF-κB激活的抑制作用。结果显示：在转染siRNA后的第24小时，细胞内NF-κB p65mRNA水平降低，蛋白表达量明显减少，而在第48小时、72小时细胞内NF-κB p65蛋白已经无法测出；在TNF-α刺激后，转染siRNA的细胞组内NF-κB p65的表达也明显受到抑制。说明RNAi技术可以抑制NF-κB p65的表达，为进一步研究血管内皮细胞的保护提供了有效的方法。