变异猪流行性腹泻病毒 M 和 N 融合双基因的原核表达及表达产物免疫原性分析

旨在构建变异猪流行性腹泻病毒（PEDV）的 M 和 N 双基因融合质粒，并分析表达蛋白免疫原性。通过扩增变异PEDV FJFQ2014毒株（GenBank登陆号KJ646580）的 M 基因和 N 基因，将 M 基因克隆至pEASY-Blunt E2（pE2）表达载体，构建出pE2-M质粒。利用同源重组原理，采用无缝拼接试剂盒将 N 基因克隆至 E 2- M 片段，转化到Trans 1-T1感受态细胞中，构建出pE2-M-N融合双基因质粒并转化Transetta（DE3），表达出相应的融合蛋白，采用SDS-PAGE和Western blot验证蛋白的表达情况。将纯化的M-N融合蛋白皮下接种BLAB/c小鼠，通过ELISA方法检测融合蛋白的免疫原性。结果表明：扩增出 M 和 N 基因，成功构建了pE2-M质粒，并将 E 2- M 基因与 N 基因进行有效连接，构建出pE2-M-N融合双基因质粒，表达出了具有免疫原性的M-N融合蛋白，该蛋白能够诱导小鼠产生相应的特异性抗体。变异PEDV的pE2-M-N双基因融合质粒的构建，为进一步开展变异PEDV的诊断技术和免疫学等研究，奠定良好基础。