人MMP-11原核表达载体pGEX-5X-3／MMP-11的构建及其融合蛋白的表达和纯化

目的 构建表达人基质金属蛋白酶-11（MMP-11）N．端肽段的重组原核表达载体pGEX-5X-3／MMP-11，获得人源性MMP-11融合蛋白。方法 应用逆转录一聚合酶链式反应（RT—PCR）从正常人子宫内膜组织扩增目的基因片段．利用体外基因重组技术将目的基因片段连接到原核表达载体pGEX-5X-3上构成重组的原核表达载体pGEX-5X-3／MMP—11，并通过酶切和测序进行鉴定。将重组质粒转化人大肠杆菌DH50t后挑选阳性克隆，用异丙基硫代半乳糖苷诱导其融合蛋白的表达并进行纯化。结果 RT—PCR获得预期大小的特异性DNA片段，经双酶切鉴定及测序证实已将人基质金属蛋白酶-11N-端肽段的cDNA片段正确插入原核表达载体中。融合表达产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定，证实相对分子量大小为4550。结论 成功构建了表达人MMP-11N-端肽段的重组原核表达载体pGEX-5X-3／MMP—11，获得相对分子量为4550的GST-MMP-11融合蛋白，为进一步制备抗人MMP-11抗体及其在临床中进一步推广应用于恶性肿瘤的快速诊断及临床疗效的评价奠定了基础。