Inhibition of Luciferase expression in mammalian cells by AAV vector plasmid mediated Luciferase shRNA

目的构建荧光素酶短发夹环产生质粒在BHK-21细胞中抑制荧光素酶的表达. 方法从人基因组DNA中用PCR方法调出人U6 snRNA启动子,接以被9 bp序列间隔的21 bp荧光素酶靶序列的反向重复序列,置于AAV载体质粒pSNAV中,构建成荧光素酶短发夹环RNA(shRNA)产生质粒pSNAV/U6/Luc.与pMAMneoLuc质粒共转染BHK-21细胞,检测其对荧光素酶表达的影响.并且单独转染荧光素酶细胞株,检测其抑制荧光素酶表达的效果.结果 pSNAV/U6/Luc对共转染的pMAMneoLuc中荧光素酶的表达抑制50%,而对荧光素酶细胞株中荧光素酶的表达抑制70%.结论实验表明荧光素酶shRNA产生质粒能够有效抑制荧光素酶在BHK-21细胞中的表达.