水飞蓟宾通过上调 P15INK4B 和 P21WAF1／CIP1活化 JNK 诱导人胰腺癌细胞 G1期阻滞及细胞凋亡

目的：探讨水飞蓟宾对胰腺癌 AsPC －1细胞的增殖抑制作用及其作用机制．方法：MTT 法和克隆形成抑制实验观察水飞蓟宾对人胰腺癌 AsPC －1细胞的增殖抑制作用，碘化丙锭（PI）单染色检测细胞周期改变，An-nexin V －FITC ／PI 双染流式细胞术检测细胞凋亡水平，Western blotting 检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达．结果：不同浓度的水飞蓟宾对胰腺癌 AsPC －1细胞的生长均有抑制作用，且呈剂量－效应和时间－效应关系（P ＜0.05），水飞蓟宾作用于 AsPC －1细胞48、72 h 的 IC50浓度分别为224.20、87.25μmol／L；克隆形成抑制实验显示，随着水飞蓟宾浓度增加，AsPC －1细胞克隆形成逐渐减少．细胞周期检测结果显示，随着水飞蓟宾浓度的增加，胰腺癌 AsPC －1细胞出现明显 G1期阻滞；水飞蓟宾处理组细胞的周期蛋白 CyclinD1、CyclinE2、CyclinA、CyclinB1表达下降，细胞周期蛋白激酶 CDK4、CDK6表达不变，细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制蛋白 P15 INK4B、P21 WAF1／CIP1表达升高，与流式检测的结果相一致．不同浓度水飞蓟宾作用48 h 后，出现明显的凋亡细胞群；同时发现 Caspase －9、Caspase －3活化降解，Caspase3下游效应蛋白 PARP 出现切割条带．JNK 蛋白表达增加并磷酸化活化，Bcl －2蛋白家族中抗凋亡蛋白 Bcl －2、Bcl －xL、Mcl －1表达明显降低，促凋亡蛋白 Bax 表达基本不变，BH3－only 蛋白 Bcl －xs、Bid、Bim 表达增加．结论：水飞蓟宾明显抑制胰腺癌细胞增殖，通过诱导 P15 INK4B、P21 WAF1／CIP1表达阻滞细胞周期在 G1期，并通过诱导 JNK 活化激活线粒体细胞凋亡途径，进而诱导胰腺癌 AsPC －1细胞凋亡．