GST－NRP－1融合蛋白的原核表达及纯化

目的：构建带有GST标签的人NRP－1融合蛋白原核表达载体，在大肠埃希菌（ E．coli）中诱导其表达，并进行包涵体的复性及纯化。方法：利用RT－PCR扩增人NRP－1基因，将其克隆至pCR－blunt载体，酶切制备NRP－1基因片段，插入表达载体pGEX－4T－1，生成pGEX－4T－1－NRP－1，转入BL21感受态细胞以IPTG诱导其蛋白的表达。裂解细菌后行Western blot检测GST－NRP－1融合蛋白的表达，表达的包涵体经复性后用Glutathione Sepharose 4B纯化。结果：RT－PCR扩增出NRP－1基因并连入pCR－blunt载体；经亚克隆构建了融合蛋白表达载体pGEX－4T－1－NRP－1。转入BL21感受态细胞后考马斯亮蓝染色检测到GST－NRP－1融合蛋白的表达，经包涵体复性后得到纯化的融合蛋白。结论：成功构建带有GST标签的人NRP－1融合蛋白原核表达载体，为进一步研究NRP－1的结构、功能及其与之相互作用的蛋白奠定了基础。