The experimental study of preventing and treating GVHD mediated by the retroviral vectors carrying the herpes simplex virus-thymidine kinase/ganciclovir(HSV-TK/GCV)under PGK prmoter

目的 研究磷酸甘油酸激酶(PGK)启动子驱动的逆转录病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)系统在小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后能否减轻移植物抗宿主病(GVHD).方法 将转HSV-TK基因的逆转录病毒感染供鼠(C57BL/6鼠)脾淋巴细胞,感染后细胞与供鼠骨髓细胞混合移植给60Coγ射线照射后的受鼠(BALB/c鼠).移植后腹腔注射GCV,用药1周,按移植后首次给药时间,分为GCV 0 d组、GCV 7 d组、GCV 12 d组.观察移植后受鼠生存期、存活率、GVHD发生率及严重程度、T细胞免疫重建(CD3、CD4、CD8)及异基因嵌合等指标.结果 TK/GCV 0 d组、TK/GCV 7 d组小鼠平均生存时间分别为(26.90±4.88)d、(27.00±4.80)d,较TK/GCV 12 d组(21.50±3.26)d和移植对照组(15.10±0.43)d明显延长(P＜0.05),Tk/GCV 0 d组与TK/GCV 7 d组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).对照组小鼠12～14 d 100%发生Ⅲ～Ⅳ级GVHD,实验组死亡小鼠有Ⅱ～Ⅳ级GVHD病理学改变,而长期生存小鼠仅出现Ⅰ～Ⅱ级GVHD.TK/GCV 0 d组、TK/GCV7 d组、TK/GCV 12 d组在移植后5、10、15 d 3个时间点检测CD4+ T细胞均高于对照组(P＜0.05),CD8+ T细胞均低于对照组(P＜0.05).移植后30 d检测10只受鼠异基因嵌合率均在95%～100%.结论 PGK启动子驱动的逆转录病毒载体介导HSV-TK/GCV系统能有效控制小鼠allo-BMT后GVHD,移植后早期预防性用药效果优于发生GVHD后治疗性用药。