Detekce protein-proteinových interakcí metodami FRET a BRET

Souhrn Studium protein-proteinových interakci in vivo se v soucasne době dostava do popředi zajmu – umožňuje prokazat nebo upřesnit již zname protein-proteinove interakce a odhalit jejich inhibitory, zachytit konformacni změny proteinů, objasnit nebo upřesnit signalni kaskady v žive buňce s minimalnim ovlivněnim jejiho buněcneho prostředi. Jednim z možných přistupů umožňujicich tuto charakteristiku jsou metody využivajici rezonancniho přenosu energie – fluorescencni (FRET) a jeho pozdějsi modifikace bioluminiscencni (BRET). Tyto metody jsou založene na zviditelněni proteinových interakci pomoci excitace fluorescencnich proteinů, ať už světelně nebo enzymaticky. Tyto přistupy umožňuji nejen lokalizovat proteiny v buňce nebo jejich organelach (připadně i v malých živocisich), ale i kvantifikovat intenzitu fluorescencniho nebo luminiscencniho signalu a odhalit pevnost vazby mezi interakcnimi partnery. V tomto přispěvku je objasněn princip metod FRET a BRET, jejich konkretni aplikace při studiu protein-proteinových interakci a jsou popsany dosavadni poznatky ziskane s využitim těchto metod a upřesňujici některe molekularni a buněcne mechanismy a signalizace souvisejici s nadorovou biologii.