Cuantificación relativa de genes relacionados con la respuesta inmune antiviral en una población venezolana de Aedes (stegomyia) aegypti

El virus DENV-3 es el responsable del segundo mayor porcentaje de afecciones hemorragicas severas causadas por este virus, solo superado por el virus DENV-2. La virulencia de este serotipo, causante de brotes epidemicos a gran escala en paises como Venezuela donde circula activamente durante todo el ano, es la razon principal del desarrollo investigativo en el campo de las interacciones virus-vector en la busqueda de un control epidemico efectivo. En el presente trabajo, se evaluo la expresion de dos genes, RNAi (dcr-2 y ago-2), que codifican para proteinas de respuesta antiviral en mosquitos con la finalidad de estudiar el cambio en la expresion de los mismos en el vector una vez infectado con el DENV-3. Para ello, se infecto artificialmente una poblacion de Aedes (stegomyia) aegypti de Trujillo, elaborandose dos grupos experimentales (15dpi y 20dpi) y un control; posteriormente se aislo, cuantifico y se realizo transcripcion reversa al RNA total aislado de los grupos. La infeccion en los grupos experimentales se evidencio por la deteccion de bandas de productos de PCR de 511pb para DENV y 290pb para DENV-3 mediante electroforesis en gel de agarosa al 2%, y se realizo la cuantificacion relativa de la expresion genetica por PCR en tiempo real. Como resultado, la expresion de los genes no presento cambios con respecto a los mosquitos no infectados (grupo control) (p DENV-3 is the responsible for the second major percentage of hemorrhagic severe affections caused by this virus, only overcome by DENV-2. The virulence of this serotype is the cause of broad scale fever outbreaks in different countries, especially in Venezuela where it circulates actively throughout the year. This is the main reason of investigative developments in the virus-vector interactions field to find an effective epidemic control. In this study, we evaluated the expression of dcr-2 and ago-2, two RNAi antiviral pathway genes in mosquitoes to study the fold change in the expression of these genes in the mosquito vector Aedes (stegomyia) aegypti infected with DENV-3. We artificially infected a population of mosquitoes from Trujillo state (Venezuela) and prepared three (3) experimental groups (15dpi, 20dpi and a control group). Later, we isolated, quantified and applied a reverse transcription to the total RNA obtained of mosquitoes and the infection in the experimental groups was detected performing a 2% agarose gel electrophoresis of the PCR products of the total RNA (511bp for DENV and 290bp for DENV3). In addition, the infection in the experimental groups was confirmed by the detection of PCR products. The fold change in dcr-2 and ago-2 expression genes was quantify by Real Time PCR. As results, the fold change expression in the ago-2 and dcr-2 were equal to the non-infected mosquitoes “control group” (p