Clonagem do cDNA e sequenciamento parcial do gene que codifi ca a enzima glutamato desidrogenase hepática de ovino Cloning of the cDNA and partial sequencing of the gene that codifi es the sheep hepatic enzyme glutamate dehydrogenase

A enzima mitocondrial glutamato desidrogenase (GDH: EC 1.4.1.2) catalisa a desaminacao reversivel do L-glutamato para 2-oxoglutarato (α-cetoglutarato) usando o NAD+ e NADP+ como coenzimas. E uma das mais importantes enzimas hepaticas encontradas em hepatocitos de bovinos, ovinos e caprinos. Infeccoes por Fasciola spp., intoxicacao grave aguda por toxinas de plantas, tais como Xanthium spp. e Senecio spp. e intoxicacao por cobre resultam na liberacao dessa enzima no sangue. O aumento da GDH indica danos ou necrose hepatica em bovinos e ovinos. Esta e a enzima de escolha para avaliar a funcao hepatica dos ruminantes. No presente trabalho o cDNA que codifica a enzima GDH do hepatocito de ovino foi sintetizado por meio de RT-PCR utilizando mRNA extraido do figado de ovino. Parte da regiao de codificacao do cDNA da GDH de ovino foi amplificada por PCR usando oligonucleotideos iniciadores sintetizados a partir do alinhamento de sequencias de ORFs de Ovis aries, Bos taurus, Homo sapiens, Rattus norvegicus e Mus musculus disponiveis em banco de dados. O cDNA foi clonado no vetor pGEM® -T Easy (Promega) e inserido em celulas calcio-competentes de Escherichia coli DH10B atraves de choque termico. O DNA plasmidial foi purificado e apos o sequenciamento a presenca de um inserto de 1292 pb foi confirmado. O alinhamento da sequencia deduzida de aminoacidos com outras especies revelou alta homologia entre as GDH.(AU)