17β-雌二醇及Wnt/β-catenin信号通路对人成骨肉瘤细胞基质Gla蛋白表达的影响

目的 观察17β-雌二醇（17β-E2 17β-estradiol）对骨肉瘤细胞（osteosarcoma MG 63）基质Gla蛋白（MGP Matrix GLA protein）表达的影响及Wnt/β-catenin信号通路在其中的作用,探讨MGP在骨质疏松症发病过程中的可能机制。方法 17β-E2 10~（-10）、10~（-8）、10-6mol/L及雌激素受体抑制剂氟维司群（Faslodex简称ICI）10-7mol/L,ICI 10-7mol/L＋17β-E2 10~（-8）mol/L干预MG63细胞48 h。用10~（-8）mol/L的17β-E2及200 ng/m L Wnt/β-catenin信号通路阻断剂Dickkopf1分泌蛋白-1（DKK-1）干预MG63细胞48 h。用10~（-8）mol/L17β-E2及MGP抑制剂华法林10μmol/L干预MG63细胞48 h。干预后的细胞提取蛋白及总RNA,后用荧光定量PCR及Western blotting观察MGP、β-catenin、Runx2、LRP5蛋白及基因的表达。结果 17β-E2能上调MGP的表达,10~（-10）、10~（-8）、10-6mol/L 17β-E2干预后,MGP mRNA的表达是对照组的4.63、7.16、2.95倍（P〈0.05）,MGP蛋白的表达分别是对照组的1.17、1.58、1.28倍（P〈0.05）,以10~（-8）mol/L 17β-E2的作用最明显。ICI能阻断17β-E2对MGP的上调作用,与单用17β-E2相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。17β-E2能增加Wnt/β-catenin经典信号通路中相关蛋白的表达,β-catenin及Runx2 mRNA及蛋白的表达与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。DKK-1则阻断17β-E2对MGP、β-catenin、Runx2、LRP5的上调作用,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。华法林可阻断17β-E2的作用,与对照组相比MGP、β-catenin、Runx2、LRP5的表达均下调,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 17β-E2调节成骨肉瘤细胞内Wnt/β-catenin信号通路同时也调节MGP表达,该作用可能是骨质疏松症发病的机制之一。