Analysis by fluorescence microscopy and flow cytometry of Monoclonal antibodies produced against cell surface antigens

La reactividad de siete anticuerpos monoclonales contra antigenos de superficie de las celulas de mieloma Sp2/O-Ag14 fue analizada simultaneamente por microscopia de fluorescencia y por citometria de flujo. Se incubaron 1 x 10**6 celulas de Sp2/O-Ag14 con 200 micronl de anticuerpo monoclonal a 4-C por 30 min. Luego de lavar 2 veces con PBS las celulas fueron incubadas a 4-C por 30 minutos con una dilucion 1:400 de anticuerpos de carnero anti-immunoglobulinas de raton, conjugados a isotiocianato de fluoresceina. Luego de lavar tres veces con PBS, las celulas se utilizaron para el analisis. Por microscoia de fluorescencia se detectaron diferentes patrones de reactividad con los anticuerpos monoclonales. Estos patrones fueron denominados: homogeneo anular, parchos anulares, parchos putiformes, difuso y homogeneo. Estos patrones podrian representar diferentes espitopes reconocidos monoclonales contra los antigenos de superficie de Sp2/O-Ag14 vario entre un 79 a un 90% al analizarse por cimetria de flujo con el sistema EPICS V. Al compararla con la microscopia de fluorescencia, la citometria de flujo determino de una forma mas rapida, sensitiva y cuantitativa la reactividad de los diferentes anticuerpos monoclonales contra antigenos de superficie de las celulas Sp2/O-Ag14